技术流程

 AFLP分子标记技术服务常见问题

 1）客户委托公司做实验服务，客户需要做哪些工作？

    客户只需提供实验材料，我们负责DNA提取及后续全部试验。收到样品后，我们

一般会给客户做预实验，根据客户预实验结果，客户满意度，决定是否安排后续实

验。公司现有64个引物组合，全部为FAM荧光标记，我们会从中筛选条带清晰、多

态性较好的引物组合给客户。在开始正式实验前，客户需支付课题服务一半的费用

，余款在公司给客户发送最后一批数据前，一次结清。

2) 关于AFLP收费价格

    目前我们的基本价格是30个样，6~8对引物，6000元，实验周期大约为20天，如果您

样品较多或引物组合较多，具体协商。

3）条带数太多

   PCR产物在ABI测序仪上电泳，检测系统的灵敏度要比银染高的多，数据分析是通过

GENESCAN软件进行分析，所以对于很弱的带，如果人工统计的话，不会把这样的

带统计进去，但软件分析的话，会读到这样的带。所以通过测序仪检测比银染条带

数多，这个可以理解。另外我们一般通过控制荧光信号强度来控制条带数，对于扩

增强以及扩增相对较弱的引物，通过控制荧光信号强度，尽量保证条带数在50~60条

，最大限度减少由于扩增强度的问题，引起的条带数的差异，最真实的反映实验结

果。

4）能否找到所有差异带的具体位置，并回收克隆差异条带？

    请参照提供数据结果中，原始数据部分，数据表中，每个检测位点都有片段大小，

有带的地方是片段的实际大小，无带的为0，很容易找到差异带。目前我们采取的荧

光引物，跑测序胶，只能指出差异带的具体位置及片段大小，不能够回收克隆差异

带。

5）共有谱带较少，多态性太高

   共有谱带为所有样品在某一位点扩增后共有的条带。因此只要有一个样品的扩增不

好，或者在这个样品无扩增，就会导致共有普带数较少或没有。所以一定要保证实

验材料新鲜，这样我们才能够保证后续试验中的PCR扩增没问题。如果样品确实有问

题，为了不影响整体数据要去除这类样品。